Vakcina poput čestica nalik na virus i njegov proces pročišćavanja nizvodno
Vakcina poput čestica nalik na virus (VLP) je tehnologija vakcine koja se zasniva na strukturi virusa, ali ne sadrži virusne genetske materijale. Oni potiču snažan imunološki odgovor oponašanjem morfologije i površinskih antigena prirodnih virusa i pružaju veću sigurnost zbog njihove nesposobnosti da se repliciraju. VLP vakcine su bolja alternativa tradicionalnim cjepivima (uživo i neaktivirani). VLP vakcina ne može se replicirati u tijelu, tako da je pogodno za sve, uključujući trudnice ili one s kompromitiranim imunološkim sustavima. Pored toga, kapsidni proteini (uključujući ostale strukturne proteine) od virusa sa segmentiranim genomima, poput virusa za suzbijanje afričkih konja, i virusi Bluetongue, također se mogu koristiti za razvijanje VLP vakcina bez brige o genetskim problemima rekombinacije poput issuženih živih vakcina. Drugo, VLP-ovi su u stanju oponašati strukturu stvarnih virusa, za razliku od neaktiviranih vakcina, čiji se strukturni proteini mogu modificirati tijekom inaktivacije, što rezultira imunogenim oštećenjem.
Sl. 1. Mehanizam formiranja VLP-a i himnika VLP-a
Značajke VLP vakcine
1. Struktura slična prirodnim virusima: VLP-ovi su samo-sastavljaju virusni jedan ili više strukturnih proteina (poput kapsidatskih proteina), a njihova veličina i oblik slični su stvarnim virusima.
2. Neefektivno: ne sadrži virusni genom, ne može replicirati ili uzrokovati bolest.
3. Visoka imunogenost: Imunološki sistem može se prepoznati efikasno i aktivirati odgovore B ćelija i T ćelija. Može izazvati neutralizaciju antitijela i ćelijski imunitet (npr. HIV, HPV vakcine).
4. Visoka sigurnost: Pogodno za ljude sa niskom imunološkom funkcijom (kao što su hepatitis B VLP vakcine).
Sl. 2. Dostupni VLP vakcini
VLP sistem za proizvodnju vakcina
VLP-ovi se mogu proizvesti kroz različite sisteme izražavanja, zajedničke platforme uključuju:
1. Sistem sa ćelijama insekata:
Prednosti: Visoki prinos, niski troškovi, pogodan za složenu sklop proteina.
Primjena: HPV vakcina, cjepiva ebole.
2. Stanice sisavanja (npr. HEK293 ćelije):
Prednosti: Post-Translacijski modifikacije bliže su ljudima i pogodno za omotane VLP-ove (kao što su vakcine gripa).
3. Kvačasni sustavi (npr. Pichia pastoris):
Prednosti: brz, niski troškovi, korišteni su u cjepivu hepatitisa B.
4. Biljni sustavi (npr. Duhanski kloroplasti):
Ekološki i skalabilan, u razvoju (npr. Novovirus VLP vakcina).
Proces pročišćavanja u nizvodno vrijeme VLP vakcine
Raznolikost VLPS sistema izražavanja dovodi do auniverziteta procesa pročišćavanja nizvodno.
Sl. 3 Općenito grafikon protoka nizvodnog procesa
Berba i pojašnjenje:
U svim vrstama kulture, ukidanje ćelijskim kulturom, postoji veliki broj čestica virusa, kao i mnogih celineskih tkiva, metaboličkih proizvoda i drugih nečistoća, ako koncentrira membranu ultrafiltracijskoj membrani, rezultira da se koncentracija ne može dovršiti i ultrafiltracijska membrana. Stoga se mora pojasniti prije koncentracije, da ukloni velike čestice u mediju za kulturu, tako da postane prozirna ili prozirna otopina, a koncentracija kulture Medij može učiniti proces koncentracije normalni i osigurati uslužni vijek trajanja ultrafiltracijskog membrane. Pojašnjenje prije koncentracije kulturnog rješenja ključna je tehnička veza u procesu koncentracije.
Efikasan proces pojašnjenja zahtijeva kombinaciju velikog kapaciteta za uklanjanje čvrstih čestica, visokog prinosa proizvoda, jednostavan razmjera i zaštitu u odnosu na operativne jedinice.
Metoda
Centrifugacija: Diferencijalna centrifugacija uklanja velike čestice.
Duboko filtracija: Koristite višestupanjski filter (npr. 1,2 μm → 0. 45μm) da biste razjasnili supernatant.
Tangencijalna filtracija protoka (TFF): Pogodno za masovnu proizvodnju, koncentrira uzorke i uklanja male čestice nečistoća.
Međutim, ako je ljestvica kultivacije prevelika, centrifugiranje traje dugo, bit će potreban veliki broj membrana dubokih filtra, pa se trošak potrošnog materijala povećava. Istovremeno, visoka gustina ćelijske kulture smanjit će opterećenje membrane duboke filtriranje, što rezultira povećanim troškovima i prekomjernim razrjeđivanjem proizvoda.
Postoje dvije vrste komponenti za TFF membrane: ravna kaseta i šuplje vlakno. TEMPETNI FILTRACIJA TOČKA (TFF) pokreće se razlika tlaka Thrembrane. Tvari i nečistoće koji su manji od membranskih pora prolaze kroz membranu, dok su nečistoće poput ćelija sa većim česticama zarobljene. Porežna veličina membrane koja se koristi za mikrofiltraciju je {{0}} 45 / 0,22 μm. Šuplje vlakno može izravno obraditi tekućinu čvrstog sadržaja, kao što je srednje kulture visokog gustoće, to može ukloniti korake centrifugiranja i prefiltracije, manje koraka, jednostavan rad, membrana se može koristiti ulaganju, u skladu sa zahtjevima modularne automatizirane proizvodnje.
Koncentracija ultrafiltracije (TFF):
Cilj: smanjiti količinu hromatografskog tretmana, poboljšati hromatografsku efikasnost i zaštititi kromatografsku kolonu.
Općenito, ultrafiltracija (TFF) može se koncentrirati više od 100 puta VLP-a, a stopa uklanjanja heteroproteina može dostići 99%. Među njima, šuplje tehnologija filtracije vlakana ima prednosti blagog i niske sile, nije lako priključiti, fleksibilan rad, dug životni vijek, niske troškove i jednostavno pojačanje za odabir šuplje vlakane za koncentrirani i pročišćeni VLP.
Kada se metoda ultrafiltracije koristi za koncentraciju i pročišćavanje, vrlo je važno odabrati veličinu desne membranske pora, što određuje efikasnost i kvalitetu koncentracije direktno. S jedne strane, potrebno je odabrati otvor blende za učinkovito zarobiti ciljne molekule kako bi se osigurao prinos, a s druge strane, efekt uklanjanja i brzina obrade heteroproteina treba u potpunosti razmotriti. Stoga je najbolji princip odabrati membranu s najvećom veličinom pora koje može primiti ciljnu molekulu i pokušati odabrati filtrirajuću membranu s jednoličnom raspodjelom veličine pore.
Primarno pročišćavanje:
1. Način oborina
Padavine od polietilena: Selektivno oborilovanje VLP-a zahtijeva optimizirana koncentracija klipa i koncentraciju soli za uravnoteženje prinosa i čistoće.
2. Kromatografija
Hromatografija afiniteta:
Affinity Heparin: Korištenje VLPS svojstava površine negativnog naboja (npr. HPV VLP).
Chromatografija za spojnu antitijela: visoka specifičnost, ali skupa.
Ionska hromatografija (IEX): Odaberite razmjenu aniona (npr. Quilumn) ili razmjenu kation-a (npr. Stupac (npr. SP stupac) ovisno o VLP-u karakteristikama napunjenosti površina i optimiziraju pH i gradijent soli kako bi se izbjeglo združivanje čestica.
Hidrofobna interakcija kromatografija (HIC): Na osnovu VLP-a površinske hidrofobnosti, pogodno za neke neusklađene VLP-ove.
Fino pročišćavanje:
Kromatografija molekularne isključenosti (sek, gel filtracija):
Uklanjanje preostalih proteina domaćina, nukleinskih kiselina ili agregata, popraćeno zamenom pufera. Visoka rezolucija, ali nizak tok, koji se često koristi kao konačni korak donošenja.
Više režim hromatografije:
Na primjer, serije CAPTO jezgre, u kombinaciji sa ION razmjenom i molekularnim efektom sito, mogu ukloniti različite nečistoće u jednom koraku.
Uklanjanje inaktivacije virusa / nukleinsko kiselo (ako je potrebno):
Nuklease tretmani: kao što su benzonase Degrading host DNK / RNA.
UF / DF: Koordinira TFF sistem za uklanjanje malih fragmenata nukleinskih kiselina i enzima.
Koncentracija i priprema:
Tangencijalna filtracija protoka (TFF):
Koncentrirajte se za ciljanje titra dok premještate međuspremnik (poput PBS ili Formulacijskih pufera).
Sterilna filtracija:
{{0} }. Giltracija membrane 22μm osigurava sterilnost.
Tipičan slučaj
Slijedi su procesi pročišćavanja nizvodno za tipične VLP cjepivo.
O CUIDLINGU
GUIDLING tehnologija je proizvodno-tehnološko preduzeće koje se fokusiraju na pojašnjenje, odvajanje i pročišćavanje biofarmaceutika. Proizvodi se široko koriste u procesu filtracije MAB, vakcine, dijagnoze, krvnih proizvoda, seruma, endotoksina i drugih bioloških proizvoda; GUIDLING TEHNOLOGIJA IMA "Kasete filter i tangencijalni uređaj za filtriranje protoka", "Hollow Fiber membrana", "Duboko membrana", "Centrilizacijski filter", "Centrifugacijski filter", a ima veliki broj liniji proizvoda, od male za jednokratne laboratorijske filtracije do proizvodnje i proizvodnje. GUIDLING tehnologija se raduje suradnji s vama!