Nizvodni proces pročišćavanja vakcine protiv svinjske dijareje
Dijareja je jedna od tri glavne bolesti koje su izazvale velike ekonomske gubitke industriji svinja u Kini. Mnogo je faktora koji uzrokuju dijareju kod svinja, a virusni faktori su najozbiljniji. Svinje svih uzrasta mogu biti zaražene, posebno prasad odojka, a stopa smrtnosti nakon infekcije može dostići i više od 50%. Virus epidemije dijareje svinja (PEDV) i virus transmisivnog gastroenteritisa svinja (TGEV) su široko rasprostranjeni u svijetu, a ova dva virusa mogu se zaraziti pojedinačno ili u kombinaciji. Trenutno ne postoje specifični lijekovi za liječenje PEDV-a i TGEV-a, a prevencija i kontrola svinjske dijareje su uglavnom komercijalne vakcine.
Tradicionalne vakcine protiv epidemijske dijareje svinja uglavnom uključuju vakcinu inaktiviranu celim virusom i živu atenuiranu vakcinu. Klinički, PEDV i TGEV tandem inaktivirana vakcina ili atenuirana vakcina, i PEDV, TGEV i svinjski rotavirus (RV) trostruko inaktivirana vakcina ili atenuirana vakcina se obično koriste, uglavnom PEDV i TGEV tandem vakcina.
Trenutno u Kini postoji mnogo vakcina protiv epidemijske dijareje svinja.
Proces proizvodnje inaktiviranih i atenuiranih vakcina je sličan, uglavnom uključuje pet koraka kulture patogena, inaktivaciju ili atenuaciju patogena, ekstrakciju i pročišćavanje patogena, pripremu i pakovanje vakcine i kontrolu kvaliteta vakcine. Ovaj članak uglavnom predstavlja postupak pročišćavanja patogena.
Pojašnjenje
Svrha pojašnjenja je da se osigura uklanjanje ćelijskih ostataka i drugih krupnih agregata čestica. U proizvodnji ćelijskih kultura raznih otrova, osim što sadrži veliki broj virusnih čestica, ima mnogo ostataka ćelijskog tkiva i metaboličkih produkata i drugih nečistoća, zbog čega je otrov u mutnom ili polu-mutnom stanju, direktnim korištenje ove operacije koncentracije otrova uskoro će blokirati ultrafiltracijsku membranu i ne može dovršiti koncentraciju otrova, što će rezultirati ostacima ultrafiltracione membrane. Stoga, prije nego što se otrov koncentriše, prvo se mora razbistriti, što se obično radi centrifugiranjem pri maloj brzini i membranskom filtracijom. Treba napomenuti da je pri korištenju tehnologije membranske separacije, zbog toga što je materijal membrane često elektronegativnih ili hidrofobnih grupa, potrebno ispitati da li materijal membrane ima adsorpciju na čestice virusa.
Efikasan korak bistrenja zahteva kombinaciju visokog kapaciteta uklanjanja čvrstih čestica i visokog prinosa proizvoda, jednostavnog pojačanja i zaštite kasnijih operativnih jedinica. Trenutno se za operacije bistrenja koristi dubinski filter.
Međutim, kada je obim uzgoja prevelik, bit će potreban veliki broj dubokih filterskih membrana, što će rezultirati značajnim povećanjem cijene potrošnog materijala. U isto vrijeme, visoka gustoća ćelijske kulture će smanjiti opterećenje membrane dubokog filtera, što će rezultirati povećanim troškovima i pretjeranim razrjeđivanjem proizvoda.
Metoda mikrofiltracije uglavnom koristi uređaj za filtriranje tangencijalnog protoka, a komponente membrane su ravna kaseta membrane i šuplja vlakna. Tangencijalna protočna filtracija (TFF) je vođena razlikom transmembranskog tlaka. Supstance i nečistoće manje od veličine pora membrane prolaze kroz membranu, dok su nečistoće poput ćelija sa većim česticama zarobljene. Veličina pora membrane koja se koristi za mikrofiltraciju je {{0}}.45/0.22μm. Mikrofiltracija tangencijalnog protoka šupljih vlakana može direktno obraditi tekućinu s visokim sadržajem čvrstih tvari, kao što je medij za ćelijsku kulturu visoke gustine, može eliminirati korake centrifugiranja i predfiltracije s manje koraka i jednostavnim radom, membrana se može više puta koristiti kroz čišćenje, smanjenje ulaganja u opremu i rad troškova, u skladu sa zahtjevima modularne automatizirane proizvodnje.
Koncentracija i prečišćavanje
Nakon preliminarnog pojašnjenja, podloga za kulturu virusa još uvijek sadrži veliki broj nečistoća, uključujući defektne čestice, virusnu ljusku, citotoksin, medij, serum i ćelijske fragmente, itd. Ako se ove nečistoće ubrizgavaju u životinje, one neće utjecati samo na djelotvornost vakcine, ali i izazivaju jak imuni odgovor domaćina, pa čak i dovode do uginuća vakcinisanih životinja. Stoga su koncentracija i pročišćavanje potrebni da bi se uklonile nečistoće kao što su heteroproteini i ćelijski fragmenti, poboljšali i inducirali učinkoviti imunološki odgovori, smanjila količina korištene vakcine i smanjile neželjene reakcije.
Princip pročišćavanja virusa: održavati biološku aktivnost i infektivnost virusa kao pretpostavku, ukloniti nečistoće virusa i ekstrahirati visoku čistoću virusa.
Trenutno, glavne metode koncentracije i pročišćavanja koje se koriste u velikoj proizvodnji su ultrafiltracija.
Metoda ultrafiltracije, uglavnom koristi uređaj za ultrafiltraciju tangencijalnog protoka, sistem za filtriranje šupljih vlakana i drugu opremu za filtriranje, pod normalnim okolnostima, primjena metode ultrafiltracije može učiniti da se virus koncentrira više od 100 puta, brzina uklanjanja heteroproteina do 99%. Među njima, tehnologija filtracije membrane šupljih vlakana ima prednosti blage i niske sile smicanja, jednostavnog začepljenja, fleksibilnog rada, dugog vijeka trajanja i niske cijene te jednostavnog pojačanja, pa se preporučuje odabir šupljih vlakana za koncentraciju i pročišćavanje virusa.
Kada se za koncentraciju i prečišćavanje koristi metoda ultrafiltracije, veoma je važno odabrati odgovarajuću veličinu pore membrane, koja direktno određuje efikasnost i kvalitet koncentracije. S jedne strane, potrebno je odabrati otvor membrane kako bi se efikasno uhvatili ciljni molekuli kako bi se osigurao prinos, a s druge strane treba u potpunosti razmotriti efekat uklanjanja i brzinu obrade heteroproteina. Stoga je najbolji princip odabrati membranu s najvećom veličinom pora koja može uhvatiti ciljni molekul i pokušati odabrati membranu filtera s ujednačenom distribucijom veličine pora.
Virus epidemije svinjske dijareje (PEDV) i virus transmisivnog gastroenteritisa (TGEV) su oba koronavirusa, koji su polimorfne sfere, sa naopako okrenutim šiljcima sličnim šiljcima, u promjeru od 60 do 190 nm. Rotavirusna bolest je zoonoza u kojoj rotavirus (RV) ima izgled poput kotača i promjera je oko 70 nm. Ova tri virusa se generalno mogu presresti upotrebom 100-750kd otvora ultrafiltracionih membrana.
Guidling Technology je nacionalna kompanija visoke tehnologije koja se fokusira na biofarmaceutike, ćelijsku kulturu, prečišćavanje i koncentraciju biomedicine, dijagnostiku i industrijske tekućine. Uspješno smo razvili centrifugalne filter uređaje, ultrafiltracione i mikrofiltracione kasete, virusni filter, TFF sistem, dubinski filter, šuplja vlakna, itd. Koji u potpunosti zadovoljavaju scenarije primjene biofarmaceutika, ćelijske kulture itd. Naše membrane i membranski filteri se široko koriste u koncentraciji, ekstrakciji i odvajanju predfiltracije, mikrofiltracije, ultrafiltracije i nanofiltracije. Naše brojne linije proizvoda, od malih, za jednokratnu upotrebu laboratorijske filtracije do proizvodnih sistema filtracije, testiranja sterilnosti, fermentacije, ćelijske kulture i više, zadovoljavaju potrebe testiranja i proizvodnje. Guidling Technology se raduje saradnji sa vama!
