Efikasan i jeftin proces za bistrenje i ultrafiltraciju kvasca koji eksprimiraju rekombinantne proteine
Ekspresija egzogenih gena kvascem ne samo da može proizvesti rekombinantne proteine i peptide, antitijela i vakcine, citokine, faktore rasta, hormone i druge bioaktivne supstance, već se može koristiti i za proizvodnju industrijskih enzima, funkcionalne hrane i bioloških materijala, što ima široku perspektivu primjene. .
Ekspresioni sistem kvasca uključuje dva najčešće korišćena ekspresiona sistema, odnosno ekspresioni sistem saccharomyces cerevisiae i sistem ekspresije metanotrofnog kvasca. Sistem za ekspresiju kvasca metanola je trenutno najrasprostranjeniji sistem ekspresije kvasca, a Pichia je najčešće korišćeni, koji može koristiti metanol kao ugljenik i energiju. Osim toga, tu su i Hansenov kvasac, Sphaeroides i tako dalje.
Bez obzira na vrstu ekspresionog sistema kvasca, procesi njegovog odvajanja i prečišćavanja su slični, a specifični tok procesa uzima ekspresiju rekombinantnih proteina i polipeptidnih lekova kvascem kao primer.
Usmjeravajuće membranske kasete za mikrofiltraciju usvajaju otvoreni kanal protoka i način filtracije tangencijalnog toka, koji može efikasno obraditi složenu tečnost za napajanje kao što je tečnost za fermentaciju kvasca i tečnost za pucanje E. coli pri velikoj brzini, i može osigurati linearno pojačanje od malog testa do proizvodne skale. Kompaktan modularni dizajn, jednostavno povezivanje cjevovoda, neovisnost i čitljivost sistema mogu zaštititi operatere i spriječiti biološko zagađenje. I bez provjere održavanja i čišćenja. Stoga je vrlo pogodan za korak bistrenja rane dalje obrade.
Glavna svrha UF/DF procesa je uklanjanje nečistoća i istiskivanje pufera. Usmjeravajuća ultrafiltracijska membranska kaseta ima dobru homogenost veličine membranskih pora i jaku hidrofilnost, što može dati membrani veći fluks i nižu adsorpciju proteina, te optimiziran dizajn kanala protoka, s manjim padom tlaka, lakim prijenosom materijala i značajno skratiti vrijeme filtracije. Štaviše, serija proizvoda je potpuna i fleksibilna kako bi zadovoljila potrebe različitih aplikacija različitih razmjera. Stoga je vrlo pogodan za UF/DF korak dalje obrade.
Slijedi slučaj primjene Guidling membranekasetau ekspresiji rekombinantnih proteina kvascem.
Mikrofiltracija bistrenja
Koristili smo {{0}}.11 kvadratnih metara membransku kasetu od 0,22 μm za pročišćavanje 1,5 L tečnosti za fermentaciju kvasca (ciljne molekulske mase proteina 42-55 KD) mikrofiltracijom. U cijelom procesu mikrofiltracije istražena je stopa oporavka ciljnog proteina, promjena zamućenosti i iscrpljivanje membranskog fluksa.
0-17min je proces koncentracije, 17-32min je proces pranja i filtriranja. Tokom cijelog procesa mikrofiltracije, TMP se postepeno povećavao, brzina ulaza tekućine je ostala nepromijenjena, a prosječni protok materijala bio je 45 LMH.
Zamućenost tekućine je bila 600NTU prije mikrofiltracije i 8NTU nakon mikrofiltracije, a zamućenost se očito promijenila.
Rezultati su pokazali da je prinos ciljnog proteina bio > 90%. Guidling Technology 0,22μm membranska kaseta je stabilna i pogodna za ovaj scenarij primjene.
Ultrafiltracijska koncentracija
Koncentracija ultrafiltracije 1,5L bistrene tečnosti (molekulska masa ciljnog proteina 42-55kd) izvedena je korišćenjem 0.11 kvadratnih metara 10kd membranske kasete. U cijelom procesu ultrafiltracije, istražena je stopa oporavka ciljnog proteina, osiromašenje membranskog fluksa i stopa obnavljanja toka vode.
Prije i nakon upotrebe, stopa oporavka membrane može doseći 90%.
0-15min je proces koncentracije, 15-18min je proces izmjene tečnosti. Tokom cijelog procesa ultrafiltracije, TMP se postepeno povećavao, brzina ulaza tekućine je ostala nepromijenjena, a prosječni protok materijala bio je 50LMH.
Rezultati su pokazali da je ciljni protein potpuno zarobljen. Guidling Technology 10kd membranske kasete mogu raditi stabilno i pogodne su za ovaj scenarij primjene.
Većina rekombinantnih proteina eksprimiranih kvascem nije bila visoko eksprimirana. Zamućenost filtrirane tečnosti je očigledno bila smanjena i stopa obnavljanja proteina je bila veća. Budući da je naknadno hromatografsko vrijeme predugo, to će uzrokovati štetne efekte na protein, kako bi se skratilo vrijeme hromatografskog uzorkovanja, može se dodati jedan korak ultrafiltracione koncentracije, a ciljni protein se može koncentrirati brzo nakon uzorka, što može postići svrhu uštede vremena, smanjenja zapremine punila i na taj način smanjenja troškova proizvodnje.
Guidling Technology membranske kasete za mikrofiltraciju generalno mogu smanjiti zamućenost napojne tekućine na manje od 20NTU, u potpunosti zadovoljavajući potrebe naknadne ultrafiltracije i hromatografije. Stopa oporavka ultrafiltracionih membranskih kaseta će varirati zbog različitih materijala, opća stopa oporavka može doseći 90-95%.
Guidling Technology vam želi dobrodošlicu da zatražite testne komplete za srodnu evaluaciju.
O Guidlingu
Guidling Technology je nacionalna kompanija visoke tehnologije koja se fokusira na biofarmaceutike, ćelijsku kulturu, prečišćavanje i koncentraciju biomedicine, dijagnostiku i industrijske tekućine. Uspješno smo razvili centrifugalne filter uređaje, ultrafiltracione i mikrofiltracione kasete, virusni filter, TFF sistem, dubinski filter, šuplja vlakna, itd. Koji u potpunosti zadovoljavaju scenarije primjene biofarmaceutika, ćelijske kulture itd. Naše membrane i membranski filteri se široko koriste u koncentraciji, ekstrakciji i odvajanju predfiltracije, mikrofiltracije, ultrafiltracije i nanofiltracije. Naše brojne linije proizvoda, od malih, za jednokratnu upotrebu laboratorijske filtracije do proizvodnih sistema filtracije, testiranja sterilnosti, fermentacije, ćelijske kulture i više, zadovoljavaju potrebe testiranja i proizvodnje. Guidling Technology se raduje saradnji sa vama!