SP Strong Cation Exchange Membrane Chromatography

Uvod u CM slabe ionske{0}}proizvode za membransku hromatografiju

 

1. Pregled

CM slaba kationska- hromatografija je tehnologija prečišćavanja u kojoj su karboksimetil grupe vezane na membranu kako bi se formirao funkcionalni modul. Razdvajanje se postiže na osnovu razlika u svojstvima naboja i gustoći naboja različitih biomolekula. Budući da većina bioloških makromolekula sadrži karboksilne ili hidroksilne grupe, njihove karakteristike naboja i veličina mogu se podesiti promjenom pH vrijednosti puferske otopine. Nakon što se biomolekule vežu za membranski modul noseći suprotne naboje, eluiranje se izvodi promjenom jonske snage ili pH mobilne faze. Molekuli sa slabijim afinitetom vezivanja se prvo eluiraju, dok se oni sa jačim afinitetom vezivanja eluiraju kasnije, čime se postiže efektivno odvajanje.

 

2. Prednosti proizvoda

2.1 Brzo i efikasno: Visok kapacitet vezivanja može se postići pri brzinama protoka do 40 puta bržim od konvencionalne hromatografije na bazi smole{2}}. U poređenju sa tradicionalnom hromatografijom sa upakovanim slojem{4}}, membranska hromatografija može skratiti vreme procesa za 30-40 puta. Tipični radni protok je 10 MV/min.

2.2 Visoka efikasnost vezivanja: Membranska hromatografija pokazuje visok kapacitet opterećenja i velike brzine protoka pod uslovima niskog pada pritiska, omogućavajući da se naelektrisani biomolekuli zarobe u jednom prolazu kroz modul.

2.3 Skalabilan i fleksibilan: Kompletan asortiman proizvoda za membransku hromatografiju može zadovoljiti različite potrebe obrade biomakromolekula, pokrivajući faze od razvoja procesa do -proizvodnje velikih razmjera. Dizajn kapsule omogućava jednokratnu-aplikaciju ili se može očistiti i ponovo koristiti po potrebi.

2.4 Povećana produktivnost: Kompaktan dizajn minimizira otisak objekta. Eliminacijom koraka pakovanja kolone, čišćenja, validacije čišćenja i skladištenja kolone, obrada može početi nakon ekvilibracije s relativno malom količinom pufera. Bez potrebe za pakovanjem kolona, ​​čišćenjem ili skladištenjem, troškovi rada mogu se smanjiti za više od 50%.

 

3 Tehnički parametri

3.1 Konstrukcijski materijali

	Laboratorijska vaga	male skale	Pilot skala	Obim proizvodnje
Volumen membrane	0,2ml	5ml	140ml	5L
Nosiva struktura membrane	Polipropilen
Membransko kućište	Polipropilen
O prsten	Silikonska guma

3.2 Radne karakteristike

	Laboratorijska vaga	mala- skala	Pilot- skala	Obim proizvodnje
Volumen membrane	0,2ml	5ml	400ml	5L
Preporučeni protok	1-6ml/min	25-150ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maksimalna radna temperatura	35 stepeni
Maksimalni radni pritisak	3bara (25 stepeni)
Maksimalna razlika pritiska	3bara (25 stepeni)
Uslovi skladištenja	20% vodeni rastvor etanola

U poređenju sa konvencionalnim medijima, životni vek CM membranske hromatografije je uporediv sa CM agaroznim gelom 6FF.

Slika 1. Promjene u kapacitetu opterećenja CM membranske hromatografije nakon višestrukih upotreba u testiranju lizozima.

Dodatno, procijenili smo efikasnost uklanjanja proteina i nukleinskih kiselina ćelije domaćina membranskom hromatografijom. Rezultati su prikazani u nastavku.

Tabela 1. Stope uklanjanja DNK i proteina ćelije domaćina u CHO-izraženom IgG materijalu korištenjem CM membranske hromatografije

Niz eksperimenata je pokazao da CM membranska hromatografija može efikasno ukloniti kontaminante uz održavanje visoke stope oporavka ciljnog IgG

	DNK				HCP
	IgG oporavak	Sadržaj (pg/mg IgG) pomoću RT PCR		Faktor uklanjanja	Sadržaj (ng/mg IgG) od strane Elise		Faktor uklanjanja
Trči	%	Prije Q membrane	Nakon Q membrane	Dnevnik	Prije Q membrane	Nakon Q membrane	Dnevnik
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Koristeći Gudiling CM membransku hromatografiju u poređenju sa drugim brendovima, podaci o kapacitetu opterećenja su prikazani u nastavku.

Kapacitet punjenja (mg/mL)	Jingbiao 1	Guidling
Lizozim	18	23
Tripsin	17	20

Tabela 2. Performanse učitavanja različitih proteina u našem proizvodu u poređenju sa proizvodima konkurenata

Ukupna procjena pokazuje da je naš kapacitet utovara uporediv sa uvezenim proizvodima.

Slika 2. Test kapaciteta opterećenja modula CM membranske hromatografije koristeći lizozim kao standardni protein.

Dinamička nosivost također je upoređena s kapacitetom uvoznih proizvoda. Verifikacija je pokazala da se lizozim može eluirati upotrebom 160 mM NaCl, što omogućava efikasno hvatanje većine ciljnih proteina.

Optimizacijom različitih uvjeta eluiranja, otkrili smo da membranska hromatografija pokazuje ponašanje eluiranja slično hromatografiji na agaroznom gelu, gdje čistoća proteina značajno varira pod različitim koncentracijama soli. U praktičnom istraživanju i razvoju i proizvodnji, potrebno je kvantitativno odrediti ravnotežne uslove eluiranja da bi se dobio ciljni protein visoke -čistoće.

 

4. Tipični slučajevi primjene

• Uklanjanje DNK, virusa i proteina ćelije domaćina
• Hvatanje plazmida, virusa i proteina, kao i prečišćavanje oligonukleotida
• Dekolorizacija fermentacijske juhe kvasca i hvatanje proteina velikog-kapaciteta

 

5. Operativni postupak / Tok rada

5.1: Priprema i montaža opreme:

5.1.1: Instalirajte modul za membransku hromatografiju na AKTA sistem za hromatografiju. Metoda instalacije je slična hromatografskom mediju sa upakovanim slojem{1}}; osigurajte da smjer protoka prati strelicu označenu na modulu. Modul se može spojiti pomoću Luer konektora ili steznih konektora.

5.1.2 Podesite ulazni protok na 5–10 MV/min i koristite pufer za ravnotežu za ispuštanje vazduha iz modula. Nastavite sa ispiranjem sve dok se ne uoče mjehurići na izlazu, a zatim spojite izlaz permeata na hromatografski sistem.

5.2.:Priprema prije{1}}upotrebe

5.2.1: Postavite ulazni protok na 5–10 MV/min i izvršite predtretman koristeći 0,5 M NaOH za više od 5 MV kako biste osigurali da membrana postigne ravnotežu.

5.2.2: Pod istim uslovima protoka, izvršite prethodnu obradu sa 1 M NaCl za više od 5 MV kako biste osigurali da membrana postigne ravnotežu.

5.3. Proces hromatografije

5.3.1 Postavite ulazni protok na 5–10 MV/min i obavite prethodnu obradu puferom za ravnotežu više od 5 MV dok membrana ne postigne ravnotežu.

5.3.2 Nakon 0,22 μm pre-filtracije, ubacite uzorak na kolonu i nastavite dok se cijeli uzorak ne nanese ili se dostigne kapacitet punjenja hromatografije.

5.3.3 Ispirati puferom za ekvilibraciju više od 10 MV dok UV vrijednost ne padne na osnovnu liniju.

5.3.4 U skladu sa dizajnom procesa, primeniti gradijent elucije ili linearni eluacioni sistem i prikupiti frakcije u segmentima prema potrebi.

5.4 CIP tretman nakon-upotrebe – CIP (Clean-na-mjestu) za sistem membranske hromatografije.

5.4.1 Postavite ulazni protok na 5–10 MV/min i tretirajte sa 1 M NaOH više od 10 MV sve dok UV vrijednost ne padne ispod osnovne linije.

5.4.2 Nakon 30 minuta cirkulirajućeg pranja, isperite vodom dok pH ne bude između 7 i 8, zatim pređite na 20% etanol i nastavite sa čišćenjem sve dok provodljivost ne ostane gotovo nepromijenjena.

5.5 Skladištenje membranske hromatografije

Nakon upotrebe i završetka CIP-a, membranski modul se može ukloniti i pohraniti namakanjem u 20% etanolu, ili pohraniti online na sobnoj temperaturi u otopini koja sadrži 20% etanola. 20% rastvor etanola treba redovno pregledavati i menjati.

 

6, informacije o narudžbi

Filter za kapsulu za hromatografsku membranu sa slabom kationskom izmjenom tipa CM-

	Laboratorijska vaga	Mala skala	Pilot skala	Obim proizvodnje
Model	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Membransko područje	0,2ml	5ml	400ml	5L

Popularni tagovi: sp jaka kationska membranska hromatografija, Kina, dobavljači, proizvođači, fabrika, veleprodaja, rasuti, na lageru, besplatni uzorak