Način održavanja i upotrebe ultrafiltracione cijevi

Način održavanja i upotrebe ultrafiltracione cijevi

Funkcija ultrafiltracione cijevi:

1) Koncentracija; 2) odsoljavanje; 3) Zamijenite bafer; 4) Ima efekat delimičnog pročišćavanja.

1. Nova ultrafiltraciona cijev se može koristiti direktno bez drugog tretmana;

2. Ultrafiltraciona cijev se ne može sterilizirati na visokoj temperaturi;

3. Tretman ultrafiltracione cijevi prilikom promjene koncentriranog proteina

Ultrafiltraciona cijev se može ponovo koristiti. Potopite ga u 0.1M NaOH 1-2h, isperite vodom, a zatim isperite odgovarajućim rastvorom (sterilizovana voda ili PBS) na centrifugi 3 puta, što se može koristiti za koncentriranje novog proteina;

4. Tretman normalno postavljene ultrafiltracione cijevi

Za ultrafiltracionu epruvetu koja se često koristi, potopite je u 0.1M NaOH 1-2h, operite je vodom i potopite u steriliziranu vodu. Pobrinite se da membrana filtera bude vlažna i spriječite rast bakterija;

5. Tretman ultrafiltracione cijevi postavljene na duže vrijeme

Ako se cijev za ultrafiltraciju ne koristi duže vrijeme, potopite je u 0.1M NaOH na 1-2 sata, operite je vodom i potopite u 20 posto etanola za skladištenje. Pobrinite se da membrana filtera bude vlažna i spriječite rast bakterija;

6. Centrifugalna brzina koja se koristi za ultrafiltracionu cijev

Centrifugalna brzina je općenito 4000 okretaja u minuti (općenito se preporučuje 3000 g, a maksimum ne može preći 4000 g). Nakon centrifugiranja od 5-8 minuta, 4ml uzorka se može koncentrirati na manje od 1ml do desetina mikrolitara; Ako je brzina previsoka, ciljni protein će pasti, što će rezultirati gubitkom ciljnog proteina; Mala brzina, dugotrajna i niska radna efikasnost;

7. Mjere opreza kada se glava pištolja proteže u ultrafiltracijsku cijev

Prilikom dodavanja proteinske otopine ili pufera u epruvetu za ultrafiltraciju, može se koristiti plava glava pištolja; Međutim, kada se koncentrirani ciljni protein apsorbira sa dna ultrafiltracione cijevi, mora se koristiti žuta glava pištolja; Kada se glava pištolja umetne u cijev za ultrafiltraciju, mora se spriječiti da dodirne filtersku membranu kako bi se izbjeglo probijanje filterske membrane;

8. Smanjite gubitak proteinske adsorpcije ultrafiltracione cijevi

Membrana ultrafiltracione cijevi može adsorbirati protein, što će smanjiti ciljni protein za oko 30 posto; Kako bi se smanjio gubitak proteina, nakon apsorpcije otopine ciljnog proteina, pročistite dno ultrafiltracione cijevi proteinskim puferom kako biste isprali većinu proteina adsorbiranog na filter membrani i smanjili gubitak ciljnog proteina; Ako je pročišćeni protein koncentrisan, obratite pažnju da koncentrirani volumen ne smije biti premali; Generalno, bez obzira na to koliko je centrifugirano, oko 200 µL rastvora proteina će se zadržati na dnu;

9. Kako odrediti kvar ultrafiltracione cijevi

Pri normalnoj upotrebi, kada filterska membrana nije probušena, koncentrirana otopina proteina ne sadrži protein ili je količina vrlo mala (uključujući ciljni protein), dok prva filtrirana otopina sadrži ciljni protein, to ukazuje da je membrana filtera neispravna i treba zamijeniti novom ultrafiltracijskom cijevi.