Najčešća pitanja o centrifugalnim filterskim uređajima

Q1. Potrebno je odvojiti proteine ​​različite molekularne težine, pa kolika bi razlika trebala biti molekularna masa proteina?

O: Veličina dva proteina treba da se razlikuje 10 puta ili više.

 

Q2. Može centrifugiratialfilter uređaji biti sterilizirani i otporni na alkalno pranje?

O: Može se sterilizirati sa 75 posto vodenog rastvora etanola, a membrana može izdržati 0.1-0.5N alkalno pranje natrijum hidroksidom.

 

Q3. Kako se nositi s tim ako se protein istaloži tijekom koncentracije?

O: Ako se protein koncentriše prebrzo ili previše koncentriran, to može uzrokovati precipitaciju proteina, a konačna koncentracija proteina nakon koncentracije ne bi trebala biti previsoka; Proteini koji su osjetljivi na brzinu koncentracije i imaju tendenciju taloženja, predložena metoda poboljšanja:

Smanjite centrifugalnu brzinu

Koristite ultrafiltracijsku membranu s graničnom vrijednošću veće molekularne težine

Duvajte i usišite koncentriranu epruvetu, a zatim centrifugirajte

 

Q4. Koji je mogući razlog zaštocentrifugalni filter uređajine može se centrifugirati?

O: Možete koristiti oko 20 posto vodene otopine etanola za početno centrifugiranje ako se ultrafiltraciona cijev ne može centrifugirati, jer je ultrafiltraciona membrana potpuno suha, površina membrane je slabo hidrofobna, a fluks se može obnoviti nakon infiltracije uz nisku rastvarač površinskog napona.

 

Q5. Pravilne metode upotrebe i skladištenja centrifugalnih filter uređaja

O: Centrifugalni filter uređaji treba centrifugirati pročišćenom vodom prije upotrebe kako bi se provjerio njihov integritet. Nakon svake upotrebe, potrebno ga je čuvati u vlažnom stanju kako bi se spriječilo isušivanje membrane.

 

Q6. Kako centrifugalni filter uređaji uklanjaju endotoksin?

O: Centrifugalni filter uređaji koje smo obezbijedili nisu tretirani endotoksinima, a pošto endotoksini postoje široko u prirodi, uzorci koji zahtijevaju endotoksine mogu se prethodno očistiti sa 0.5N natrijum hidroksidom prije eksperimenta, a zatim oprati sa RO voda za uklanjanje većine endotoksina.

 

Q7. Kada se koncentrirani protein koristi za nizvodnu analizu, nađe se da postoji smetnja, koji je razlog?

O: Uređaji za centrifugalni filter mogu se prethodno oprati puferskom otopinom ili pročišćenom vodom. Ako smetnje i dalje postoje, isperite sa 0.1N natrijum hidroksidom, a zatim isperite pročišćenom vodom.

 

Q8. IUtvrđeno je da u koncentratu nakon koncentracije nema ciljnog proteina. Koji su mogući razlozi?

O: 1) Početna koncentracija proteina ne bi trebala biti preniska, ako je koncentracija preniska, membrana možda neće moći zadržati.

2)Odaberite odgovarajuću veličinu pora na membrani. Centrifugalna koncentracija filtarske cijevi pripada filtraciji u slijepoj ulici, a veličina pore na membrani je općenito manja od 2 puta ili veća od ciljnog proteina.

3) Odaberite pravu centrifugalnu brzinu

4) Da li se ciljni protein precipitira

 

Q9. Pasivaciona obrada centrifugalnih filter uređaja

O: Prethodna obrada površine centrifugalnih filter uređaja može smanjiti adsorpcijski gubitak proteina na površini membrane, u većini slučajeva, predtretman kolone prije koncentriranja razrijeđene otopine proteina može poboljšati oporavak, jer otopina može ispuniti izložene prazna mjesta adsorpcije proteina na membrani i površini, metoda pasivizacije je da se kolona prethodno natopi velikom količinom otopine za pasivizaciju više od 1 sat, kolona se temeljito ispere destilovanom vodom, a zatim se kolona jednom centrifugira destilovanom vodom da biste u potpunosti uklonili otopinu za pasivizaciju koja može ostati na membrani, pazite da se membrana ne osuši nakon pasiviranja, ako je želite zadržati za buduću upotrebu, potrebno je dodati sterilnu destilovanu vodu kako bi membrana ostala vlažna., kontaktirajte naši inženjeri za uobičajena rješenja za pasivizaciju.

 

Q10. Filtrira li ultrafiltraciona membrana molekule hijerarhijski?

A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 posto ako se koristi ultrafiltracijska membrana od 100 kd, međutim, molekuli manji od veličine pora membrane ne prolaze potpuno slobodno kroz membranu. Stopa molekularne retencije od 67 kd je više od 70 posto, a protein od 43 kd je također više od 40 posto odsječen, različite komponente u miješanom rastvoru prolaze kroz membranu ne tako jednostavno i lako kao jednokomponentni rastvor, u praksi , ako želite izolirati dvije makromolekule, razlika u molekularnoj težini između njih trebala bi biti osam puta ili više.

 

Q11. Kako efikasno odvojiti velike i male molekule ultrafiltracijom?

O: Zbog potreba procesa, nečistoće u makromolekulama se uklanjaju, ili se male molekule uklanjaju iz makromolekula, to je normalno u proizvodnji. Veoma je potrebno odabrati odgovarajuću veličinu pora membrane, metodu filtracije i uslove rada. Uopšteno govoreći, ako je MWCO specifikacija membrane odabrana između dva proteina, može se postići relativno idealno razdvajanje. Ako je otopina proteina relativno razrijeđena, rad pod niskim pritiskom će također pomoći u postizanju boljih rezultata. Odaberite filtraciju tangencijalnog protoka i izvršite višestruku dijafiltraciju da biste dobili bolji efekat odvajanja.